EKSTRAKSI DNA DAUN DAN BIJI JARAK PAGAR (Jatropha curcas L.) DENGAN METODE DOYLE DAN DOYLE (1990)

Abstrak

ABSTRAK
Jarak pagar (Jatropha curcas L.) merupakan salah satu tanaman sebagai sumber biodiesel yang memiliki beragam aksesi. Cara untuk membedakan masing – masing aksesi dapat dilihat berdasarkan dari ciri morfologinya atau berdasarkan marka DNA. DNA dapat diekstraksi dari seluruh bagian tanaman. Pada penelitian ini DNA diekstrak dari sampel daun dan biji jarak pagar dengan menggunakan metode Doyle dan Doyle (1990). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui metode dan hasil ekstraksi DNA dari berbagai jenis sampel dari bagian tanaman jarak pagar antara lain biji (J1), daun segar (J2), daun yang telah disimpan dalam lemari es suhu 40 C (J3), daun muda (J4) dan daun tua (J5) yang telah dibekukan pada suhu -800 C selama 1 minggu. Ekstraksi DNA menggunakan buffer ekstraksi dengan komposisi 2% CTAB (Cetyltrimethyl Ammonium Bromide), 100 mM Tris/HCl, pH 8, 1.4 M NaCl, 20 mM EDTA, pH 8.0, 1% polyvinylpyrrolidone (PVP)-40, 2% mercaptoethanol dan elektroforesis menggunakan gel agarosa 0,8% dalam larutan TAE 0,5X. Hasil ekstraksi pada semua sampel J1, J2, J3, J4 dan J5 dapat menunjukkan pita DNA sehingga sampel untuk ekstraksi DNA dapat menggunakan salah satu jenis bahan ekstrak dari berbagai sampel biji dan daun dengan atau tanpa perlakuan penyimpanan untuk penelitian marka DNA aksesi tanaman jarak pagar.
Kata kunci: Ekstraksi, DNA, Doyle dan Doyle (1990), Jarak pagar, Biodiesel.
ABSTRACT
Jarak Pagar (Jatropha curcas L.) is one of the plants as a source of biodiesel that has various accessions. The ways to distinguish each accession can be seen based on morphological characteristics or based on DNA markers. DNA can be extracted from all parts of the plant. In this study DNA was extracted from Jatropha curcas L. leaves and seeds samples using the Doyle and Doyle (1990) method. The aims of this study is to determine the methods and results of DNA extraction from various types of samples from J. curcas L. plant parts including seeds (J1), fresh leaves (J2), leaves that have been stored in a refrigerator at a temperature of 40 C (J3), young leaves (J4 ) and old leaves (J5) which have been frozen at -800 C for 1 week. DNA extraction using an extraction buffer with a composition of 2% CTAB (Cetyltrimethyl Ammonium Bromide), 100 mM Tris / HCl, pH 8, 1.4 M NaCl, 20 mM EDTA, pH 8.0, 1% polyvinylpyrrolidone (PVP) -40, 2% mercaptoethanol and electrophoresis using 0.8% agarose gel in 0.5X TAE solution. Extraction results on all samples J1, J2, J3, J4 and J5 can show DNA bands so that samples for DNA extraction can use one type of extract material from various seed and leaf samples with or without storage treatment for research on Jatropha plant accession DNA markers.
Keywords: Extraction, DNA, Doyle and Doyle (1990), Jatropha curcas L., Biodiesel.